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由於蛋白質中存在含有共軛雙鍵的酪氨酸和色氨酸,因此蛋白質溶液在 280 nm 處具有紫外吸收峰。 在一定的濃度範圍內,蛋白質溶液在該波長下的吸光度與其濃度成正比,因此該特性可用於定量蛋白質。
該方法快速、簡單,不消耗樣品,低濃度鹽不干擾測定,可測定為蛋白質溶液。
由於蛋白質的紫外吸收峰值經常因pH值變化而改變,因此在應用這種方法時應注意溶液的pH值。 最佳樣品的pH值與標準曲線制定時的pH值一致。
該方法對於酪氨酸和色氨酸含量與標準蛋白質相差較大的蛋白質的測定誤差較大,因此適用於酪氨酸、色氨酸等與標準蛋白質氨基酸含量相近的樣品的測定。 如果樣品中含有嘌呤、嘧啶等吸收紫外線的物質,就會有很大的干擾。 例如,與核酸混合,核酸可以吸收波長為280nm的紫外線,但它吸收260nm的紫外線更強。 相反,對於蛋白質,280 nm的紫外吸收值大於260 nm的紫外吸收值。
280 260吸收差規則可用於正確校正核酸對蛋白質濃度測定的干擾作用。
在蛋白質分子中,酪氨酸、苯丙氨酸和色氨酸殘基的苯環含有共軛雙鍵,使蛋白質具有吸收紫外線的特性。 只要存在共軛雙鍵等不飽和鍵,蛋白質分子就可以溶解到一定濃度的溶液中,然後用紫外吸光度測定。
如果你有任何問題,可以直接問我。 參考。
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只要能做成溶液,就可以測量!
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